• 1
  • 2
  • 2
  • 13
  • 14
  • 15
  • 16
вернуться на главную

Опыт определения колиформных бактерий по МУК 4.2.1018-01 и ИСО 9308-1:2000

На основе обобщения мирового опыта и научных достижений международной организацией по стандартизации проведен очередной пересмотр стандарта ИСО 9308 «Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий».

Стандарт состоит из трех частей. Первая — метод мембранной фильтрации принята в 2000 году. В отличие от ранее действующего стандарта, рекомендованного для исследования разного типа вод, новый документ предусматривает использование метода мембранной фильтрации для анализа воды с низким фоновым ростом микроорганизмов, в основном прошедшей дезинфекцию.

Данная часть документа рекомендует параллельное проведение двух тестов(методик) — Стандартного и Быстрого. В основе обоих тестов лежит использование традиционных селективных сред. Оба теста выполняются с применением методических приемов, которые максимально снижают селективность метода, что способствует обнаружению ослабленных во внешней среде бактерий.

Быстрым тестом предусматривается определение только Escherichia coli.

Стандартный тест предназначен для определения колиформных бактерий и Escherichia coli.

Стандартный тест включает культивирование посевов на мембранных фильтрах на селективной среде Тергитол при 37°С в течение 24 часов. Стандартом отмечено, что увеличение времени инкубации до 48 часов может привести к повышенной чувствительности метода и может быть полезным для чашек, на которых не обнаружены типичные колонии после 24-х часовой инкубации. Типичные колонии требуют биохимического подтверждения: определение цитохромоксидазной активности и образования индола при 44°С. Утилизация лактозы выявляется на питательной среде, подтверждения газообразования не требуется. Продолжительность анализа 48 −72 часа. Таким образом, в стандартном тесте по сравнению с предыдущим документом: из 4-х сред, в число которых входила и среда Эндо, оставлена одна — Тергитол, которая, по-видимому, обладает наименьшими ингибирующими свойствами, не требуется подтверждения газообразования при разложении лактозы, что сокращает время исследования на 48 часов, в целях снижения ингибирующего влияния температуры на ослабленные микроорганизмы определение термостабильности E.coli подтверждается на этапе идентификации.

Быстрый тест предусматривает культивирование посевов на мембранных фильтрах на триптон-желчном агаре с использованием приемов, способствующих восстановлению ослабленных и поврежденных во внешней среде бактерий: первые 4-5 часов посевы необходимо инкубировать при температуре 37°С на неселективной питательной среде (триптон-соевом агаре). Заключительный этап проводится при 44°С на селективной среде — триптон — желчном агаре, для выделения бактерий, устойчивых к солям желчных кислот, с последующим определением образования индола. Допускается использование приготовленного extempore двухслойного агара, в котором верхний слой неселектиный. Общая продолжительность анализа 24 часа. Таким образом, стандарт ИСО к E.coli относят микроорганизмы растущие на среде с желчными кислотами при 44°С и образующие индол.

Конечным результатом по определению E.coli при работе параллельно стандартным и ускоренным методом является больший из двух.

В ЗАО «РОСА» по заданию МУП МОСВОДОКАНАЛ с января 2004 года проводилось определение колиформных бактерий и E.coli в пробах воды питьевой согласно МУК 4.2.1018-01 и стандарту ИСО 9308-1:2000. Исполнение метода ИСО проводилось двумя рекомендуемыми тестами: стандартным и быстрым. В быстром тесте использовали свежеприготовленные чашки с двухслойным агаром, в кото-ром нижний слой — типтон-желчный, верхний- триптон-соевый. Культивирование посевов с изменением температуры инкубации с 30°С до 44°С проводилось в программируемом термостате.

При параллельном исследовании проб питьевой воды за исследуемый период согласно отечественному и международному стандарту ни колиформных бактерий, ни E.coli выделено не было. Однако, при выполнении анализа методом ИСО9308-1:2000 в единичных пробах на среде с Тергитолом отмечен рост грам-положительных микроорганизмов, чего не наблюдалось при параллельном определении на среде Эндо.

Таким образом, качество питьевой воды исследованных проб оказалось достаточно высоким и не позволило выявить преимуществ апробируемых методик.